2015年卫生资格考试(临床免疫检验)复习笔记:沉淀反应及免疫电泳

牛课网 考试宝典 更新时间:2024-05-18 22:21:49

卫生资格考试(临床免疫检验)复习笔记:沉淀反应及免疫电泳

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Δ 颗粒型抗原 凝集反应 eg:细菌、RBC

Δ 可溶性抗原 沉淀反应 eg:血清蛋白溶液、多糖抗原

Δ 沉淀反应(precipitation reaction):可溶性抗原与相应抗体结合,在电解质存在,两者比例恰当时,可出现肉眼可见的沉淀现象

Ag:沉淀原 Ab沉淀素

实验中为使抗原抗体比例(数量)恰当,应稀释Ag

Δ 分类

① 液相沉淀:絮状沉淀、环状沉淀、免疫比浊测定

② 凝胶扩散:双扩、单扩

③ 凝胶免疫电泳:免疫电泳、对流免疫、火箭免疫

Δ 絮状沉淀试验

出现絮状/块状沉淀

玻片法:检测病毒(定性)

试管法:方阵滴定(半定量)

Δ 环状沉淀反应

测抗原(法医血迹鉴定)

Δ 免疫透射浊度测定法

检测IgG、IgA、IgM、C3

Δ 凝胶扩散(agar immunodiffusion):可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下,在琼脂基质中扩散,当两者相遇,比例恰当时结合,可出现肉眼可见的沉淀线

Δ 双扩(double immunodiffusion)

原理:可溶性抗原和抗体在含有电解质的琼脂凝胶板的对应孔中,两者各自向四周凝胶中扩散,当二者相对应时即发生特异性反应,在浓度比例合适处形成可见的白色沉淀线

方法:① 制琼脂板(3ml 1.5%NS琼脂)

② 打孔(双孔型/三角孔型/梅花孔型)

③ 加样(平孔沿加满)

④ 扩散(37℃,24h观察结果)

用途:① 双孔型:已知Ag测未知Ab,or已知Ab测未知Ag

② 三角孔型:抗原性质分析

③ 梅花孔型:测Ag有效稀释度

优点:简单、易行、用途广

缺点:敏感性低、出结果慢、只定性,不能定量

Δ 单扩(single immunodiffusion)

原理:将一定量抗体混浇于琼脂内,置于凝胶孔中的定量抗原向四周扩散,抗原与相应抗体在比例合适处形成白色沉淀环,其大小与抗原浓度成正比

方法:① 已知抗体+琼脂制板,打孔

② 在琼脂板小孔中加梯度抗原

③ 抗原向四周扩散形成沉淀环

④ 抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系,绘制标准曲线

⑤ 从标准曲线上查出并计算出待测标本含量

用途:定量测定IgG、IgA、IgM、C3等含量

Δ 对流免疫电泳(counter-immunoelectrophoresis)

原理:定向加速的免疫双扩(双扩+电场,使抗原、抗体相对泳动)

方法:Ag、Ab分别在琼制板上不同孔内,Ag在负极,Ab在正极,电泳

Δ 影响电泳的因素

①溶液的pH,常用8~9,蛋白质带负电

②溶液的离子强度,越高,泳动慢,一般0.02~0.2M

③电场强度,越高,越快,一般4~6V/cm(琼脂长),约40V左右

④电渗作用:电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象,电渗方向与电泳方向相反

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