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Δ 颗粒型抗原 凝集反应 eg:细菌、RBC
Δ 可溶性抗原 沉淀反应 eg:血清蛋白溶液、多糖抗原
Δ 沉淀反应(precipitation reaction):可溶性抗原与相应抗体结合,在电解质存在,两者比例恰当时,可出现肉眼可见的沉淀现象
Ag:沉淀原 Ab沉淀素
实验中为使抗原抗体比例(数量)恰当,应稀释Ag
Δ 分类
① 液相沉淀:絮状沉淀、环状沉淀、免疫比浊测定
② 凝胶扩散:双扩、单扩
③ 凝胶免疫电泳:免疫电泳、对流免疫、火箭免疫
Δ 絮状沉淀试验
出现絮状/块状沉淀
玻片法:检测病毒(定性)
试管法:方阵滴定(半定量)
Δ 环状沉淀反应
测抗原(法医血迹鉴定)
Δ 免疫透射浊度测定法
检测IgG、IgA、IgM、C3
Δ 凝胶扩散(agar immunodiffusion):可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下,在琼脂基质中扩散,当两者相遇,比例恰当时结合,可出现肉眼可见的沉淀线
Δ 双扩(double immunodiffusion)
原理:可溶性抗原和抗体在含有电解质的琼脂凝胶板的对应孔中,两者各自向四周凝胶中扩散,当二者相对应时即发生特异性反应,在浓度比例合适处形成可见的白色沉淀线
方法:① 制琼脂板(3ml 1.5%NS琼脂)
② 打孔(双孔型/三角孔型/梅花孔型)
③ 加样(平孔沿加满)
④ 扩散(37℃,24h观察结果)
用途:① 双孔型:已知Ag测未知Ab,or已知Ab测未知Ag
② 三角孔型:抗原性质分析
③ 梅花孔型:测Ag有效稀释度
优点:简单、易行、用途广
缺点:敏感性低、出结果慢、只定性,不能定量
Δ 单扩(single immunodiffusion)
原理:将一定量抗体混浇于琼脂内,置于凝胶孔中的定量抗原向四周扩散,抗原与相应抗体在比例合适处形成白色沉淀环,其大小与抗原浓度成正比
方法:① 已知抗体+琼脂制板,打孔
② 在琼脂板小孔中加梯度抗原
③ 抗原向四周扩散形成沉淀环
④ 抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系,绘制标准曲线
⑤ 从标准曲线上查出并计算出待测标本含量
用途:定量测定IgG、IgA、IgM、C3等含量
Δ 对流免疫电泳(counter-immunoelectrophoresis)
原理:定向加速的免疫双扩(双扩+电场,使抗原、抗体相对泳动)
方法:Ag、Ab分别在琼制板上不同孔内,Ag在负极,Ab在正极,电泳
Δ 影响电泳的因素
①溶液的pH,常用8~9,蛋白质带负电
②溶液的离子强度,越高,泳动慢,一般0.02~0.2M
③电场强度,越高,越快,一般4~6V/cm(琼脂长),约40V左右
④电渗作用:电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象,电渗方向与电泳方向相反
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