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Δ 概述
免疫血清:含有某种抗体的血清。它是免疫化学和细胞免疫的主要试剂,其质量的好坏由Ab的效价、特异性决定
来源:由Ag免疫动物而来
(Ag可以是纯Ag,如白蛋白,也可以是复杂Ag,如人全血清)
Δ 免疫血清的制备
主要程序:选择免疫动物-选择抗原-(应用佐剂)-进行免疫-(间隔,多途径)试血-放血-纯化-鉴定-保存
动物的选择:
1.常用动物:哺乳类较多:马、羊、猪、猴、兔豚鼠等;禽类:鸡
2.选择原则:免疫的Ag与动物的种类要求越远越好(即免疫原性好);与免疫血清的量有关:所需量大,用马、羊、猴等大动物;所需量小,用兔、豚鼠等小动物;动物的个体状态:雄性、适龄、健康、无感染;其它:根据实验的特殊要求。
抗原的条件:
具有良好的抗原决定簇(表位):易被LC识别而产生Ab;具有可靠的纯度;足够大的分子量及相对复杂的空间结构;注射量:严格掌握。宁可小,一般用25µg/kg动物;量大可出现免疫抑制
佐剂的应用:
佐剂(adjuvant):同Ag一起或预先注入机体,能增强机体对该Ag的免疫应答或改变免疫应答类型的物质(多用于可溶性Ag,颗粒性Ag一般不用佐剂)
使用佐剂的目的:增加Ag的免疫原性,从而提高抗血清的效价
福氏不完全佐剂(FIA)
组成:羊毛脂+石腊油,二者比例为4:1
制备:将Ag溶液逐滴加入羊毛脂和石蜡油中,不断研磨,使Ag均匀混于佐剂中,形成“油包水”乳剂
要形成“油包水”乳剂的原因:延缓Ag在体内的破坏和消失,并缓慢释放Ag;刺激单核-巨噬细胞对抗原的处理和提呈能力;促进淋巴细胞的增殖、分化从而增强机体的免疫应答
福氏完全佐剂(FCA)
组成:羊毛脂+石腊油+卡介苗
表现:促进、诱发Ag产生强大、持久的细胞免疫反应;促使机体合成新的Ig种类
特点:卡介苗同Ag一起加入到羊毛脂和石蜡油中,几滴即可;免疫效果更好;注射局部易形成肉芽肿,溃烂,但对Ab生成无危害
注射间隔及次数:
单次注射:Ab生成慢、持续时间短、效价低,但特异性好
再次注射:注射两次,Ab效价上升快,持续时间长
间隔一定时间多次注射:Ab效价高、生成时间长,但特异性差,一般为7~15天
一般采用后两种注射方法
注射途径:
常用的有:静脉、皮内、皮下、淋巴结、腹腔,采用一种途径多点注射
可溶性Ag:常选用皮内或皮下(皮内易引起细胞免疫反应,对产生Ab有利)
颗粒性Ag:常选用静脉或腹腔
若Ag量少,可直接注射淋巴结
注射量:
蛋白质Ag一般注射1~4mg/次,注射量过大易形成免疫耐受
试血:末次Ag注射后,测定血清中Ab的效价,若Ab达到所需效价,即刻放血,若未达到,继续追加免疫一次
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