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1、支原体培养。标本的取材男性为尿道内口约0.5cm以上，女性提倡子宫颈棉拭子取材，而不用尿培养。支原体的培养和鉴定是确诊支原体感染的唯一方法。每种培养基都用酚红作标记，人型支原体和脲原体可使培养基变成粉红色。

2、支原体血清学鉴定。1984年开始使用一种微量的酶标免疫法，能检测支原体的8种血清型抗体。这对于诊断患者为哪一种支原体血清型感染是很有帮助的。但临床上，不必都作支原体血清型鉴定，通过支原体培养证明有支原体感染，马上积极治疗是非常必要的。